单克隆及细胞株筛选培养基

一、简介

宥艺生物单克隆及细胞株筛选培养基均不含血清、水解物及任何动物来源的成分，适合于 HEK293、CHO 细胞单克隆及细胞株筛选，大大提高单克隆率。

宥艺生物部分培养基已完成美国 DMF 登记（DMF039790），更有力的支持客户需求。

二、产品描述

三、推荐使用说明

Minipool 筛选使用说明

1. 将宿主细胞由原培养基转移至 Minipool SFM01 培养基中，并传代 2~3 次，使细胞适应该培养基；

2. 根据平台工艺进行转染；

3. 配制铺板培养基：100% Minipool SFM01+25 μM MSX（建议 DHFR 缺陷性使用 50 μM MTX）；

4. 将转染后恢复 24~48h 的细胞铺至 96 孔板中，铺板密度 5000~10000cells/well，培养体积 200 uL，培养 16~21 天后检测蛋白表达量（需定期补液）；

5. 将表达量较高的 Minipool，1:4 传代转移至新的 96 孔板中（200uL/well），静态培养 7 天，检测其表达量；

6. 根据表达量筛选出优势 Minipools，并逐渐扩增至 24 孔板（参考下图 2），培养 3~5 天后检测蛋白表达量，进一步筛选出优势 Minipools；

图 2 Minipool 扩培

7. 将细胞由 24 孔板扩增至 6 孔板，培养 3~5 天后检测蛋白表达量，进一步筛选出优势 Minipools；

8. 将6孔板扩增至摇瓶中，传代2~3次后冻存Minipools，并将剩余的细胞接种至摇瓶进行Fed-Batch 培养；

9. 根据 Fed-Batch 实验，综合细胞生长、细胞代谢、蛋白表达量，筛选出优势 Minipools。

单克隆筛选使用说明

1. 单克隆筛选可参考下图流程（图 3）：

2. 将优势 Minipool 进行复苏，培养 2~3 代后，使细胞活率＞90%，进行单克隆筛选；

3. 配制铺板培养基：80% SC SFM01+20%条件培养基（该 Minipool 上清液，需无菌过滤去除细胞） +25 μM MSX；

4. 取出摇瓶，将细胞充分混匀后取适量细胞悬液进行计数；

5. 根据计数结果，取细胞悬液用新鲜培养基稀释至密度 1.0×10 6cells/mL 的母细胞悬液（此步骤可进行计数，以确保稀释无误）；

6. 将步骤 4 中的细胞悬液充分混匀，用新鲜培养基进行有限梯度稀释（0.5 cell/well，200uL/well），最终稀释至 2.5 cells/mL（若使用 VIPs 等设备，将细胞密度稀释至 5 cells/mL）；

7. 标记 96 孔板板号，将步骤 5 中得到细胞稀释悬液稀释至对应铺板培养基中，充分混匀后铺板，每孔 200 μL；

8. 将 96 孔板放入 CO2培养箱，36.5~37℃，5~8%CO2，静置孵育培养；

9. 96 孔板静置培养 3h 后，使用细胞成像系统进行拍照，单克隆铺板完成；

10. 单克隆筛选步骤可参考 Minipool 筛选步骤，筛选过程可参考下图（图 4）：

四、产品运输及存储

运输：常温或冷链运输；

存储：2~8℃ , 干燥、避光保存；

有效期：

基础培养基干粉：2 年；

基础培养基液体：1 年；

补料培养基干粉：2 年；

补料培养基液体：1 年（开封后建议在 3 个月内使用完）。

五、测试数据