杂交瘤培养基

一、简介

宥艺生物 HY02 为基础培养基（Basal Medium），适合于杂交瘤、SP2/0、NS0 等细胞的高密度悬浮培养，主要用于蛋白高水平表达。

HY02 基础培养基中均含有谷氨酰胺及蛋白因子，可以提高培养基的通用性且不影响蛋白纯化，支持杂交瘤细胞高密度高表达，基础培养基可联合使用宥艺高性能补料培养基 HEK293 FM01&Feed B，可支持细胞高密度生长及活率维持，实现更高水平的蛋白表达。

二、产品描述

三、产品运输及存储

运输：常温或冷链运输；

存储：2~8℃，干燥、避光保存；

有效期：

基础培养基干粉：2 年；

基础培养基液体：1 年；

补料培养基干粉：2 年；补

料培养基液体：1 年（开封后建议在 3 个月内使用完）。

四、应用范围

宥艺杂交瘤培养基可用于杂交瘤细胞冻存、复苏、传代、高密度稳定培养，可实现细胞快速生长，维持细胞高活率及蛋白高表达。

五、使用指南

一）、细胞复苏

1．提前打开水浴锅，并设置温度至 36.5℃~37.0℃；

2．将细胞从液氮罐中移出后，快速在水浴锅中融化冷冻的细胞（＜3 min）；

3．将冷冻管中的细胞液全部转移到 125 mL 含有 30 mL 预温过的基础培养基的摇瓶中；

4．置于 36.5~37.0℃，5~8% CO2，转速 120 rpm（轨道振幅 50 mm）的摇床中培养；

5．细胞至少传代 2 次，待细胞完全复苏且活率在 90%以上，可按计划进行后续操作。

二）、细胞传代

适应性传代

当从含血清培养基转到 HY02 中时需要做培养基适应（可不适应）：

1．以 0.3~0.5×10 6 cells/mL 密度接种到 5%血清+95%HY02 中培养 48h 左右，当细胞活率≥90%，细胞倍增时间与原培养基无差异时，认为此步骤培养基适应已经完成；

2．以 0.3~0.5×10 6 cells/mL 密度接种到 2%血清+98%HY02 中培养 48h 左右，当细胞活率≥90%，细胞倍增时间与原培养基无差异时，认为此步骤培养基适应已经完成；

3．以 0.3~0.5×10 6 cells/mL 密度接种到 100%HY02 中培养 48h 左右，当细胞活率≥90%，细胞倍增时间与原培养基无差异时，认为此步骤培养基适应已经完成，可进行后续工作；

细胞传代

1．将基础培养基放入 36.5~37.0℃条件下预热 20 min；

2．检测活细胞密度，按接种密度为 0.3~0.5×10 6 的最终传代体积，计算所需种子液量；

3．无菌转移所需量的种子液，添加至含所需体积的已预热的基础培养基的摇瓶中；

4．将摇瓶放入温度 36.5~37.0℃，90~150 rpm（振幅 50 mm）（摇瓶底面积增大，需减小摇床转速）， 5%~8% CO2的细胞培养摇床中进行培养；

5．每 2~4 天用新鲜的培养基按上述步骤进行传代培养。

三）、细胞冻存

1．准备处于对数生长期状态较好的细胞，且细胞活率在 90%以上；

2．检测活细胞密度，计算所需的冻存培养基体积，计算最终细胞密度 1~1.5×10 7 cells/mL；

3．准备好所需的冻存培养基：90%基础培养基（含 1%血清）+10% DMSO，2~8℃冷藏保存；

4．设置离心力 200×g，离心 5 min，用冻存培养基重新悬浮细胞至冻存体积；

5．将悬浮细胞等分保存至适宜规格的细胞冻存管中；

6．将细胞冻存管置于程序降温盒中，按照降温标准进行降温；

7．将细胞转移到液氮罐中保存。

六、测试数据