原料药（DS）颜色是生物制品放行、稳定性及可比性研究中的重要质量属性，随着高浓度制剂的被开发，生物行业经常报告淡黄色或棕色DS颜色。研究表明，无论细胞系是什么，培养基中高浓度铁离子和维生素B12可能会导致DS颜色变棕色。铁导致蛋白质中的色氨酸氧化形成N-甲酰犬尿氨酸和犬尿氨酸产物，这可能是造成黄色DS的原因。粉色DS由残留的VB12与DS结合所致。棕色则是黄色与粉色颜色的叠加效应。
文章由BMS团队发表在《Process Biochemistry》：Brown drug substance color investigation in cell culture manufacturing using chemically defined media: A case study.
一、浓缩DS时颜色的显露
图1 高浓度DS时颜色的显露
实验结论：当DS浓缩倍数增加时，颜色变得越来越深。
二、颜色与理化质量属性之间是否有关联
表1 颜色与理化质量属性之间是否有关联
实验结论：颜色与质量属性之间无关联。（个人观点：是有关联，比如CEX，但是作者没有展示这部分数据）；
三、颜色产生原因机理探究
3.1 影响因素筛选
表2 探究铁、VB12、铜等影响
实验结论：高铁培养基会导致DS颜色变黄，高VB12培养基会导致DS变粉色；铜离子没有显著影响。
3.2 影响机理探究
图3 棕色产生机理探究
实验结论：通过液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）的胰蛋白酶肽段图谱分析发现，融合蛋白表面少量色氨酸（Trp）残基被氧化，生成黄色 NFK 和Kyn。在含有11×铁的基质培养基中制备的DS样品中，高水平的 NFK 和Kyn残基与黄色形成相关。在含有12×VB12的基质培养基中制备的DS样品中，高水平的残留VB12与粉红色形成相关。将黄色液体（如DS5（ProA））与粉红色液体（如VB12）混合后，会呈现棕色。
四、结论
培养基中高浓度的铁离子是导致DS颜色变棕色的罪魁元凶。
五、讨论
1：铁离子导致了DS颜色变深；
2：第三期中提到铁离子会导致抗体酸性峰增加，制剂稳定性不好；
3：铁离子似乎对产品质量都是负向作用，但能提高抗体表达量。因此是在乎质量还是产量？需要平衡，或者在如今情况下，高产量是否真的重要？需要认真思考。
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