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半胱氨酸工程化抗体（THIOMABs）在ADC药物的定点偶联技术中具有关键作用。本研究在CHO细胞培养体系中表达THIOMABs时发现，与传统抗体相比，其酸性变体比例显著升高。研究揭示了酸性变体的双重形成机制：
1）工程化半胱氨酸位点被谷胱甘肽（GSH）加帽修饰；
2）细胞培养过程中发生的传统翻译后修饰（PTMs）。
进一步发现，这两种机制在酸性变体形成过程中存在共同作用，难以简单区分，必须同时消除才能显著降低酸性变体水平。因此，通过调控温度与pH值以减少PTMs，并补充L-半胱氨酸以取代GSH加帽反应，成功降低了酸性变体的比例。
本研究揭示了THIOMABs酸性变体的双重形成机制，并提出了一种可行的细胞培养优化策略，在有效降低酸性变体的同时，提升了THIOMABs的整体质量属性。
文章链接：Zhou S , Cao X , Yin X ,et al.Dual formation mechanisms of acidic variants in cysteine-engineered antibodies and strategies for their reduction[J].Frontiers in Bioengineering & Biotechnology, 2025.DOI:10.3389/fbioe.2025.1615263.
正文拆解
一：实验方法
二：实验结果
三：实验总结
联合使用添加剂L-半胱氨酸与低温低pH调控策略，使THIOMABs的酸性峰比例显著降低了50%，成功将其降至与传统抗体相当的可接受范围内。具体而言，工程化位点的谷胱甘肽（GSH）加帽修饰得到有效抑制，传统的翻译后修饰（PTMs）也同步减少。本研究阐明了THIOMABs中酸性变体形成的双重机制及其协同作用效应。这一组合策略显著提升了ADC抗体中间体的质量属性与稳定性。
四：讨论
1. 低温等策略导致了表达量的显著降低；
2. L-Cys的添加可能会对抗体的其他质量属性带来不好影响；
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2. 深度优化氧化还原性物质，如GSH，VC等，显著降低抗体酸性峰，提升主峰纯度；
如上图所示，通过使用宥艺二合一单补料直接影响修饰速率，可有效降低酸性峰，提高主峰。
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