宥艺生物推出NK细胞无血清培养基
历经多月的产品测试和稳定性评估测试，宥艺生物推出NK细胞无血清培养基，最大化的提升您的工艺性能。首先，让我们先来了解一下这款无血清NK细胞培养基吧！
T01是上海宥艺生物科技有限公司研发团队通过数月技术研发及放置稳定性评估后推出的一款T细胞和NK细胞通用的无血清培养基，当搭配不同的Kit时可分别培养T细胞或NK细胞。
使用方法推荐
【主要成分】：该产品为无血清培养基，不含动物源成分。主要含糖类、氨基酸、无机盐、及微量元素等。
【预期用途】：本品适用于人NK细胞体外高效扩增培养（适应于肝素为抗凝剂的样本）。
1. 性能指标
2.作业流程
Day0，第0天
1.样本血浆分离及灭活
1.1. 开启水浴锅，温度设置为56°C。
1.2. 供者外周血50mL~100mL（其中10mL用于血常规和传染病检测），将采集的血样转入50mL离心管。
1.3. 700g 离心10min（快升慢降）。
1.4. 用移液器吸取上层淡黄色血浆于一个新的50mL离心管并标识。
1.5. 将标识好的离心管用封口膜封口，放入56°C水浴锅中，热灭活30min。
1.6. 2000g以上高速离心10min。吸取上清于新的离心管，即刻转入4℃冰箱。
2.PBMC分离
2.1. 用移液管将下层的血细胞与生理盐水1:1混匀，按 2:1（血细胞悬液：Ficoll）将血细胞悬液沿离心管管壁缓慢加入装有Ficoll的离心管内。
2.2. 将离心机升降速调至最低，700g 离心20min。
2.3. 离心结束后，用移液管吸取中间白膜层置于新的50mL离心管，加入40mL生理盐水混匀，700g 离心5min洗涤两 次，以去除血小板等杂质。
3. NK特异性诱导
3.1. 提前配制NK细胞培养基，并预热至37℃备用。
3.2. PBMC前处理（仅针对单采 PBMC样本，其他样本不需要执行该步骤）
3.2.1. 贴壁处理：一般将 PBMC 按 1×10^8 cells 添加 20mL NK细胞培养基，重悬后静置贴壁 2h。
3.2.2. 贴壁处理后，将未贴壁的 PBL收集到离心管后，用生理盐水洗涤 2 次培养瓶，将所有细胞悬液一并收集至离心管中，400g 离心 10min 后，弃去上清。
3.3. 用 NK 细胞培养基重悬 PBMC，取样计数。
3.4. 将细胞悬液转移至抗体包被好的 T75 培养瓶中，根据细胞计数结果，补加NK细胞培养基、终浓度10%（Vol）已灭活自体血清及2.5μL/mL的Kit-1，接种细胞密度控制为1.5-2*10^6/mL。
Day 3，第三天
1.将NK细胞培养基放至37℃培养箱进行预热。
2.取出培养的NK细胞，根据细胞生长状态添加1~2倍体积的NK细胞培养基及2.5μL/mL的Kit-1。
Day 5，第五天
1.将NK培养基放至37℃培养箱进行预热。
2.取出培养的NK细胞，将培养瓶内细胞悬液转移至50mL离心管，并使用移液管取新鲜的NK培养基轻轻冲洗培养瓶底部，以尽可能收集贴壁细胞。：+86 21-64909996-393 传真：+86 21-64909996-730CulLymNK-KIT01
3.400g离心5min，去除上清液。以去除抗体和激活因子，避免细胞刺激过度。
4.用少量（5~10mL）NK培养基重悬，混匀取样计数。
5.根据计数结果进行计算，加入NK培养基及2.5μL/mL的Kit-2，按1.2~1.5×10^6接种至新的75T或175T培养瓶继续培养。
Day 7~D14/D21
1.第7天，将NK培养基放至37℃培养箱进行预热。
2.取出培养的NK细胞，显微观察及取样计数，按照0.8~1×10^6/mL密度添加NK培养基及2.5μL/mL的Kit-2。
3.之后每隔一天，取出培养的NK细胞，显微观察及取样计数，按照0.8~1×10^6/mL密度添加NK培养基及2.5μL/mL的Kit-2。
4.培养至D12，按照0.8~1×10^6/mL密度添加NK培养基及2.5μL/mL的Kit-3。
5.培养至D14时细胞总量一般能到达2×10^9以上，最长培养时间为21天，当细胞量到达需求量时，离心收获细胞，经检测合格后，按需求使用。
3.部分数据测试
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关于宥艺生物
上海宥艺生物科技有限公司是一家专注于提供化学成分限定商业化培养基、客户定制化培养基的研发及生产，培养基配方开发及优化服务的高科技生物技术公司。涵盖CHO细胞培养基、HEK293培养基、Vero细胞培养基、昆虫细胞培养基、杂交瘤培养基，T及NK细胞培养基和干细胞培养基等。致力于解决未被满足的培养基市场需求及拓展培养基应用领域，经过2年的研发已经建立完善的6大培养基产品线：
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